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          威斯騰公眾號

          原代細胞培養
          人眼眶/大鼠心肌成纖維細胞

          時間:2020-07-17 16:12:00 瀏覽:6416次


          威斯騰生物經過10多年的發展,獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗,并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件,萬級凈化細胞房,這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時,威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗,結合平臺已有的技術優勢,建立了完善的體外藥篩實驗,并引進RTCA(Real-time cellular Analysis,實時無標記細胞記錄儀),在藥篩過程中,全程實時記錄細胞真實狀況,為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

          無菌操作注意事項

          細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔,先用紫外燈和臭氧殺菌1h,然后通風30min,操作前需要換細胞間專用拖鞋,雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒,穿上實驗服,戴上一次性口罩和帽子,操作時不能大聲說話,整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。


          甲狀腺相關性眼病患的眼眶成纖維細胞原代培養

          (1)無菌條件下,取出結締組織(人眼眶結締組織,重慶醫科大學附屬第二醫院提供)后在含2×雙抗的預冷的PBS中洗3次。

          (2)在PBS中除去脂肪組織,將結締組織剪成約2mm2小塊。

          (3)用完全培養基將細胞培養板潤洗一遍,待組織稍干后小心貼于細胞培養板上。

          (4)將貼有組織的細胞培養板置于細胞培養箱中倒置30min,使組織盡快貼壁。

          (5)30min后將完全培養基加入細胞培養板中,剛好沒過組織即可,培養數天。

          (6)3d后半量換液,隔日觀察細胞爬出情況并添加培養基。

          約8d后有細胞爬出。


          大鼠心肌成纖維細胞原代分離培養

          (1)將SD乳鼠在75%酒精中浸泡1-5min,然后固定在泡沫板上,先用碘酒消毒胸腹部,再用酒精消毒。取出無菌剪刀和鑷子,先用酒精棉球再次消毒,剪開胸,取心尖部位,快速置于含雙抗的預冷的PBS溶液潤洗3遍。

          (2)剔除周圍結締組織,將心臟置于無菌平皿中,將心臟盡量剪碎,平皿內加入適量0.125%的胰酶,在37度培養箱中,采用分次消化,每次消化5分鐘,一共消化8~10次。

          (3)每次消化后取上清液,并加入等量的含10%的DMEM/F12培養基,輕輕混勻,中和胰酶的消化,防止消化多度。用100目細胞過濾篩子過濾含細胞的混合液,最后將過濾后的細胞懸液1000R/MIN離心5分鐘。離心后收集沉淀,用PBS再次重復離心3次。用細胞培養基將細胞沉淀重懸。于細胞培養瓶中培養。

          (4)在培養90分鐘左右,將未貼壁的細胞懸液吸出。此時已經貼壁的是心肌成纖維細胞,加入DMEM/F12培養基,放入培養瓶繼續培養。

          (5)24h換液,并每日觀察心肌成纖維細胞的生長。

          威斯騰實驗服務流程



          威斯騰生物服務項目

          細胞生物學檢測 高通量測序 代謝組學
          細胞原代培養 mRNA測序 氣相色譜GC/MS
          MTT檢測 LncRNA測序 液相色譜LC/MS
          細胞凋亡檢測 全基因組測序 核磁共震NMR
          細胞周期檢測 RNA-Seq測序
          細胞克隆形成實驗 外顯子測序 影像學相關實驗
          Transwell細胞遷移/侵襲 16s擴增子測序 Micro-CT
          流式分選 Small RNA測序 小動物活體成像
          CCK8/XTT檢測 宏基因組測序 核磁共振
          臺盼藍檢測細胞活性 單細胞測序 PET-CT
          藥物篩選細胞學實驗 circleRNA測序
          細胞粘附性檢測 甲基化測序 基因編輯動物
          細胞劃痕實驗
          條件性敲除小鼠/大鼠
          細胞生物學整體實驗
          全基因敲除小鼠/大鼠
          細胞成管實驗

          病理檢測 CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 基因芯片
          掃描電鏡 基因定點突變細胞系 LncRNA芯片
          透射電鏡 單基因敲除細胞系 miRNA芯片
          HE染色 多基因敲除細胞系 mRNA芯片
          免疫組化 目的基因敲入細胞系 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
          Tunel(原位末端凋亡法)檢測 報告基因敲入細胞系 SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
          激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除細胞系
          免疫熒光

          Masson染色 CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
          原位雜交 基因敲除大鼠/小鼠
          熒光原位雜交 基因敲入大鼠/小鼠
          特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)

          行為學檢測 藥物篩選服務項目 藥效學評價
          曠場實驗 高通量自動藥物篩選平臺 抗腫瘤藥物藥效學評價
          重復性刻板行為檢測 細胞高內涵藥物篩選平臺 心血管系統藥物藥效學評價
          動物跑臺檢測 蛋白質組學靶標研發平臺 泌尿系統藥物藥效學評價
          強迫游泳 分子藥理研究平臺 內分泌系統藥物藥效學評價

          生物膜片鉗藥物篩選平臺 抗炎免疫藥物藥效學評價

          常規藥物體外篩選


          【本平臺合作項目】
          分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!
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