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          細胞生物學檢測
          CCK8/MTT/XTT檢測

          時間:2020-07-21 14:06:00 瀏覽:4638次

          (a) MTT:

          MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料?;罴毎阽晁崦摎涿负图毎豤的作用下四唑環開裂,生成藍色的甲月替結晶并沉積在細胞中,甲月替結晶的生成量僅僅與活細胞數目成正比(死細胞中的琥珀酸脫氫酶消失,不能還原MTT)。還原生成的甲月替結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺、20%的十二甲基磺酸鈉(PH 4.7)或10%酸化十二甲基磺酸鈉(PH 4.7)的溶液中溶解。利用酶標儀測定490nm波長處的光密度測出OD值,即反映活細胞數目。也可利用DMSO(二甲基亞砜)來溶解。用DMSO之前要盡量去掉培養液,一遍DMSO溶解甲月替顆粒,進行比色測定。

          (b) CCK-8檢測細胞增殖(活力):

          CCK-8(cell-counting kit-8)檢測試劑盒是應用WST-8取代MTT被還原,WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。且WST-8相較XTT和MTS化學性狀更穩定, 因此實驗結果相對更加穩定。此外,WST-8相較MTT、XTT,線性范圍相對寬,靈敏度更高。

          當細胞增殖得越多越快,則formazan產生量越多,顏色越深;反之,當內外因造成的細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。應用酶標儀測定吸光值并進行統計學計算便可以獲得細胞增殖(活性)相關數據。

          (c) XTT:

          化學名:2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide,作為線粒體脫氫酶的作用底物,被活細胞還原成水溶性的橙黃色產物。當XTT與電子偶合劑(例如PMS)聯合應用時,其所產生的水溶性的產物的吸光度與活細胞的數量成正比。用XTT代替MTT可省去溶解還原產物結晶的步驟,XTT可以被活細胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產物(formazan)。代謝產物在OD450處有吸收峰。

          1、使用方便,省去了洗滌細胞;2、檢測快速;3、靈敏度高,甚至可以測定較低細胞密度;4、重復性優于MTT。 缺點:XTT水溶液不穩定,需要低溫保存或現配現用。

          應用范圍

          mtt檢測應用

          應用案例

          cck8的方法檢測PDGF-D對細胞的毒性,本實驗采用2個藥物濃度,分別作用于細胞24小時、48小時、72小時,然后通過CCK8檢測增殖情況,從而反映其藥物對細胞的毒性。從表1以及柱狀圖中了解到藥物濃度越大作用細胞時間越長,其細胞的增殖率越大,即藥物對細胞的毒性越小。

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